①健康成人（国内データ及び海外データ）^1）-3）
日本人及び外国人の健康成人に対し、エトラシモド2mg又はプラセボを1日1回、7日間反復投与したときの末梢血中リンパ球数の変化は以下のとおりであった。
エトラシモド2mgを投与したときの末梢血中リンパ球数の最低値までの期間の平均値は、日本人で4.7日、外国人で5.8日であり、ベースラインからの変化率の平均値は日本人で－53.6％、外国人で－54.1％であった。

②潰瘍性大腸炎患者（国内データ及び海外データ）^{1）,4）,5）}
海外及び国際共同第Ⅲ相試験（APD334-301/ELEVATE UC 52試験及びAPD334-302/ELEVATE UC 12試験）では、エトラシモド2mgを1日1回経口投与後、第2週までに末梢血中リンパ球数の最大の減少を示し、変化率の平均値はそれぞれ－46.7%及び－47.5%であった。リンパ球数が0.5×10⁹/L未満又は0.2×10⁹/L未満の患者の割合は、ベースライン後でそれぞれ32.3％～45.8％及び0.9％～5.6％、投与終了時でそれぞれ21.8％～23.7％及び0.0％～2.1％であった。エトラシモド投与中止後2週間以内に、APD334-301/ELEVATE UC 52試験で82％、APD334-302/ELEVATE UC 12試験で77％の患者においてリンパ球数の基準値（1.02～3.36×10⁹/L）への回復が認められた。
ベースラインからの推移は以下のとおりであった。

①併合解析（Pivotal UC Pool）（国内データ及び海外データ）^6）
Pivotal UC Pool（APD334-301/ELEVATE UC 52試験［海外第Ⅲ相試験］及びAPD334-302/ELEVATE UC 12試験［国際共同第Ⅲ相試験］の併合解析）において、初回投与後4時間のモニタリング期間で認められた心拍数の投与前からの変化量の平均値は、エトラシモド2mg群では投与後3時間の－7.2bpmで最大となり、投与後4時間では－6.7bpmであった。心拍数の平均値は、初回投与後1時間でプラセボ群75.3bpm及びエトラシモド2mg群69.4bpm、2時間で75.8bpm及び67.0bpm、3時間で76.0bpm及び67.0bpm、4時間で75.8bpm及び67.3bpmであった。
心拍数の投与前からの変化量の平均値の推移は、投与後2週間でプラセボ群1.9bpm及びエトラシモド2mg群－0.3bpm、投与後12週間でそれぞれ0.5bpm及び0.0bpm、投与後52週間でそれぞれ0.3bpm及び－0.3bpm、最終観察時でそれぞれ1.4bpm及び0.3bpmであった。

②第Ⅲ相試験（国内データ及び海外データ）^4）,5）
海外第Ⅲ相試験（APD334-301/ELEVATE UC 52試験）では、バイタルサインによる心拍数のベースラインからの平均変化量の最大値は、プラセボ群及びエトラシモド群でそれぞれ投与後4時間の－0.4bpm及び投与後3時間の－7.3bpmであり、実測の平均値はそれぞれ75.5bpm及び66.7bpmであった。
国際共同第Ⅲ相試験（APD334-302/ELEVATE UC 12試験）では、バイタルサインによる心拍数のベースラインからの平均変化量の最大値は、プラセボ群及びエトラシモド群でそれぞれ投与後1時間の－0.1bpm及び投与後2時間の－7.3bpmであり、実測の平均値はそれぞれ75.0bpm及び67.0bpmであった。

S1PとS1P受容体の結合により活性化される下流シグナルには、βアレスチン動員を介したGタンパク質非依存性シグナル伝達経路と、Gタンパク質依存性シグナル伝達経路がある。S1P受容体調節薬はβアレスチン動員を介してS1P₁の内在化及び分解を引き起こし、これによって細胞表面のS1P₁の発現が低下することにより、リンパ組織からのリンパ球の移動が妨げられる^8）。そこで、ヒトS1P受容体におけるβアレスチン動員アッセイを用い、エトラシモドのアゴニスト作用（S1P_1-5）及びアンタゴニスト作用（S1P_2,3に対するS1Pによる活性化との競合）を検討した。
各受容体に対するエトラシモドのEC₅₀値及び相対最大効力は以下のとおりであった。
エトラシモドのS1P₁に対するEC₅₀値は6.10nmol/Lと完全アゴニスト作用を示し、相対最大効力はS1Pの110%であった。S1P₄及びS1P₅に対するEC₅₀値はそれぞれ147nmol/L及び24.4nmol/Lと部分アゴニスト作用を示し、相対最大効力はそれぞれ63%及び73%であった。ヒトS1P₂及びS1P₃については、10μmol/Lにおいてもβアレスチンの動員を誘導せず、S1P活性化も阻害しなかった。

S1P受容体を介した主要なシグナル伝達カスケードの評価系は、βアレスチン動員アッセイ及びGTPγS結合アッセイである。βアレスチン動員アッセイは血中リンパ球数の減少をもたらす機能的アンタゴニスト作用の評価系である。GTPγS結合はGタンパク質依存性シグナル伝達経路を形成し、心拍数減少及び収縮遅延の機序に関与すると考えられていることから^8）、GTPγS結合アッセイはGタンパク質シグナル伝達の評価系とされる^10）-12）。これら2つのアッセイ系を用いて、ヒトS1P_1-5に対するエトラシモド及び代謝物M3、M6、ならびにS1P受容体を調節する試薬の作用を検討した。
各アッセイにおけるEC₅₀値及びE_max値は以下のとおりであった。

エトラシモド及びS1P受容体を調節する試薬によって惹起されるシグナル伝達について、βアレスチン動員によるS1P₁内在化への作用を検討した。
IC₅₀値及びE_max値は以下のとおりであった。

cAMP蓄積はGタンパク質依存性シグナル伝達経路の下流における影響の指標となる^8）。そこで、エトラシモド及びS1P受容体を調節する試薬によって惹起されるシグナル伝達について、cAMP蓄積への作用を検討した。
IC₅₀値及びE_max値は以下のとおりであった。

S1P₂又はS1P₃を発現したCHO細胞の細胞内カルシウム放出試験において、エトラシモドはヒトS1P₂又はS1P₃を介した細胞内のカルシウム放出を刺激せず、またS1P₂又はS1P₃の活性化を阻害しなかった。

S1P受容体の活性化によるGタンパク質依存性シグナル伝達経路は、心筋細胞のGタンパク依存性内向き整流性カリウム（GIRK）I_KACh（アセチルコリン活性化内向き整流性カリウムチャネル）の活性化を惹起するが、これは心拍数減少に関与すると考えられる^10）-12）。そこで、心筋細胞のGIRK電流（I_KACh）に対する、エトラシモド及びその他のS1P受容体調節薬の相対活性を検討した。
I_KACh活性化の程度は、以下のとおりであった。

健常雌C57BL/6マウスを用い、エトラシモドによる血中リンパ球減少作用の検討を行った。
血中リンパ球減少の程度は下表のとおりであった。
エトラシモドを経口投与したとき、溶媒対照群と比較してCD4^＋及びCD8^＋Tリンパ球ならびにBリンパ球の用量依存的な減少が認められたが、単球、顆粒球及びナチュラルキラー（NK）細胞数に影響は認められなかった。
いずれの投与群においても、溶媒対照群と比較して、NK細胞及び骨髄系細胞の減少は認められなかった。

CD4陽性CD45RB^high T細胞を重症複合型免疫不全（SCID）マウスに養子移入して誘発した実験的大腸炎モデルにエトラシモドを予防的に反復経口投与し、定量ポリメラーゼ連鎖反応（qPCR）により大腸組織の免疫細胞マーカーのRNAレベルを定量した結果は以下のとおりであった。
3mg/kg/日以上のエトラシモドの予防的投与により、体重減少、大腸の炎症、T細胞及び単球の浸潤などの重要な大腸炎の指標が有意に抑制された（p＜0.05、Dunnett’s test）。また、エトラシモドにより大腸における炎症性サイトカイン産生が減少した（p＜0.05、Dunnett’s test）。

MDR1a遺伝子をノックアウトした自然発生性大腸炎モデルマウス（MDR1a KOマウス）（12匹/群）にエトラシモド1mg/kg又は3mg/kgあるいは溶媒を1日1回経口投与したところ、エトラシモド1mg/kg群及び3mg/kg群で溶媒対照群と比較して体重増加量の減少（p≦0.05、Student’s t-test）、内視鏡スコアの重症度（p≦0.05、Kruskal-Wallis test［w/Dunnett’s post-hoc］）、結腸重量の増加（p≦0.05、ANOVA［w/Dunnett’s post-hoc］）、結腸の長さの短縮（p≦0.05、ANOVA［w/Dunnett’s post-hoc］）及び結腸の重量/長さの比（p≦0.05、ANOVA［w/Dunnett’s post-hoc］）が有意に改善した。
エトラシモド3mg/kg群では、結腸におけるIL-10、CXCL9、IL-1β、CXCL10、IL-6、CXCL1、TNFα、IL-17Aのレベルが溶媒対照群と比較して有意に低下した（p≦0.05、ANOVA［w/Dunnett’s post-hoc］）。さらに蛋白濃度で補正した濃度では、エトラシモド3mg/kg群の結腸におけるIL-10、IL-1β、IFNγ、CXCL1、TNFα及びIL-17Aの濃度は、溶媒対照群と比較して有意に減少したが（p≦0.05、ANOVA［w/Dunnett’s post-hoc］）、IL-4及びIL-23の濃度には有意差は認められなかった。
また、結腸の炎症、腺欠損、過形成、浮腫、好中球スコア及びリンパ球凝集体数などの複数のパラメータが有意に改善し（p≦0.05、ANOVA/Kruskal-Wallis test［Dunnett’s/Dunn’s post-hoc］）、エトラシモド1mg/kg群及び3mg/kg群で溶媒対照群と比較して血中リンパ球数が有意に減少した（p≦0.05、ANOVA［Dunnett’s post-hoc］）。
脾臓を採取してフローサイトメトリーにより分析したところ、エトラシモド群1mg/kg群及び3mg/kgで溶媒対照群と比較してリンパ球レベルの有意な低下が認められた（p≦0.05、ANOVA［w/Dunnett’s post-hoc］）。